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bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

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bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株 詳細資料

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

商品屬性

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

鑒定

STR鑒定正確

種屬

小鼠

生長特性

貼壁

細胞形態

上皮細胞樣

規格

1×10?cells/T25培養瓶

分類

小鼠細胞系

 

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株


商品介紹

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 上皮細胞樣

凍存條件

凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養方案A(默認)

生長培養基:

DMEM10% FBS1% P/S

培養條件:

氣相:空氣,95%CO25%, 溫度:37

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2-3/

注意事項 1.該細胞在低密度下形態不規則,細胞數量少,鋪展面積大,高密度后形態會趨于一致,胞體密集;2.細胞增殖偏慢,初次傳代建議1:2

參考資料(來源文獻)

The cells were   transformed by infection with the NTKmT retrovirus vector that expresses   polyomavirus middle T antigen

 


細胞處理:

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株
1) 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株

細胞傳代培養操作步驟:

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株
(1)當顯微鏡下細胞形態和生長密度達到90%時,進行傳代。

(2)吸棄培養液。添加PBS清洗1~2次,搖勻后棄掉。

(3)加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

(4)培養瓶放入37℃培養箱進行消化,3min左右拿出,用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量,發生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養瓶使剩余細胞脫落,加入2倍量的中止消化,并吹打均勻,避免消化過度。

(5)細胞懸液吸至離心管內,1000rpm/min離心3~5min。

(6)吸棄上清,加入培養液重懸細胞,吹打細胞使其均勻分散。

(7)吸棄細胞懸液,選擇適合的密度接種到新培養瓶中,補充培養液并搖勻,放置37℃的CO2培養箱進行培養。

(8)根據細胞生長狀態確定換液或傳代時間。

(9)細胞凍存

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細胞接收后的處理:

bEnd.3小鼠腦微血管內皮細胞株
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。


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